Plasmide Double Nickase (h) Keratin 2: sc-402077-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Keratin 2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Keratin 2 Double Nickase (h) et le plasmide Keratin 2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Keratin 2 | sc-402077-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Keratin 2 | sc-402077-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT2 code la kératine 2, une protéine de filament intermédiaire de type II principalement exprimée dans les kératinocytes suprabasaux, où elle forme des hétérodimères avec des kératines de type I pour constituer le réseau cytosquelettique de l’épiderme. La kératine 2 contribue à la résistance mécanique, à la cohésion intercellulaire et à une différenciation correcte lors de la stratification épidermique, en s’intégrant aux complexes jonctionnels associés aux desmosomes et au remodelage des filaments intermédiaires en réponse au stress. Une altération de la fonction de KRT2 perturbe l’organisation des filaments et l’intégrité de l’épiderme, et des variants pathogènes sont associés à des troubles de la kératinisation, notamment l’ichtyose épidermolytique superficielle. Comme la dynamique des filaments de kératine s’articule avec des voies contrôlant la formation de la barrière cutanée, la cornification et les réponses au stress mécanique ou inflammatoire, KRT2 constitue une cible pertinente pour étudier l’homéostasie cutanée et la régulation du cytosquelette.
Keratin 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.