KCTD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409961

概要

KCTD5は、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有タンパク質をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質恒常性（プロテオスタシス）においてアダプターとして機能します。多くの場合、CUL3を基盤とするE3リガーゼ複合体と協働し、基質タンパク質のユビキチン化と分解（ターンオーバー）に影響を与えます。これらの相互作用を通じて、KCTD5はシグナル伝達ネットワークの動態や細胞内プロテオスタシスに作用し、神経機能に関連する過程やストレス応答性経路を含むプロセスにも関与し得ます。KCTDファミリーのアダプターの制御異常は、タンパク質分解の破綻やシグナル出力の攪乱と関連することが報告されており、これらはがん生物学および神経生物学的疾患に共通して見られる特徴です。そのためKCTD5は、ユビキチン化機構と経路制御および細胞表現型とを結び付ける調節ノードとして研究されています。

KCTD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKCTD5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KCTD5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KCTD5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KCTD5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KCTD5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KCTD5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KCTD5の機能に不可欠なKCTD5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KCTD5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KCTD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKCTD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KCTD5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KCTD5 HDRプラスミド（h）および KCTD5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKCTD5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKCTD5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。