KCC2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402080

Descripción general

SLC12A5 codifica el cotransportador K+-Cl− específico de neuronas KCC2, un regulador clave de la homeostasis intracelular del cloruro que permite la neurotransmisión GABAérgica y glicinérgica hiperpolarizante. Al promover la extrusión de Cl−, KCC2 modula la intensidad sináptica inhibitoria, la excitabilidad de la membrana y la maduración de los circuitos neuronales, y se integra funcionalmente con vías de transporte iónico y de señalización sináptica que gobiernan la plasticidad dependiente de la actividad. Las alteraciones en la expresión o la función de KCC2 se han asociado con un desequilibrio entre excitación e inhibición en el sistema nervioso central, lo que respalda su relevancia para estudios sobre epilepsia, trastornos del neurodesarrollo, dolor neuropático y neurodegeneración. KCC2 también se utiliza como marcador y como nodo mecanístico para investigar el desarrollo de sinapsis inhibitorias, la dinámica del cloruro y las oscilaciones de red.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KCC2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC12A5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC12A5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC12A5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KCC2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC12A5 para la investigación de la señalización de KCC2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC12A5 críticos para la función de KCC2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC12A5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KCC2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KCC2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC12A5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KCC2 (h) y el plásmido HDR KCC2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC12A5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC12A5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.