KCC2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402080

Visão geral

SLC12A5 codifica o cotransportador de K+-Cl− específico de neurônios KCC2, um regulador-chave da homeostase intracelular de cloreto que possibilita a neurotransmissão GABAérgica e glicinérgica hiperpolarizante. Ao promover a extrusão de Cl−, o KCC2 modula a força sináptica inibitória, a excitabilidade de membrana e a maturação dos circuitos neurais, além de interagir funcionalmente com vias de transporte iônico e de sinalização sináptica que governam a plasticidade dependente da atividade. Alterações na expressão ou na função do KCC2 têm sido associadas a um desequilíbrio entre excitação e inibição no sistema nervoso central, reforçando sua relevância para estudos sobre epilepsia, transtornos do neurodesenvolvimento, dor neuropática e neurodegeneração. O KCC2 também é utilizado como marcador e como nó mecanístico para investigar o desenvolvimento de sinapses inibitórias, a dinâmica do cloreto e as oscilações de rede.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KCC2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC12A5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC12A5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC12A5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KCC2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC12A5 para a investigação da sinalização de KCC2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC12A5 críticos para a função KCC2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC12A5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KCC2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo KCC2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC12A5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KCC2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR KCC2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC12A5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC12A5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.