KCC1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422973

Descripción general

Slc12a4 codifica el cotransportador K–Cl KCC1 del ratón (SLC12A4), un transportador electroneutro que acopla el eflujo de K+ y Cl− para regular el cloruro intracelular, el volumen celular y la homeostasis iónica. La actividad de KCC1 contribuye a las vías de disminución reguladora del volumen, a las respuestas al estrés osmótico y a la señalización dependiente de cloruro, que puede influir en el potencial de membrana y en la dinámica del citoesqueleto. En linajes hematopoyéticos e inmunitarios, KCC1 respalda programas de flujo iónico vinculados a la hidratación de los eritrocitos y a los estados de activación de los leucocitos, aportando un contexto mecanístico para estudiar la fisiología impulsada por el transporte. La desregulación del transporte K–Cl se ha asociado con propiedades alteradas de los glóbulos rojos y con fenotipos inflamatorios o metabólicos más amplios, lo que convierte a Slc12a4 en un nodo útil para la investigación del transporte iónico y la homeostasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KCC1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc12a4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc12a4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc12a4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KCC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc12a4 para la investigación de la señalización de KCC1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Slc12a4 críticos para la función de KCC1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc12a4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KCC1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KCC1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc12a4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KCC1 (m) y el plásmido HDR KCC1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc12a4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc12a4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.