karyopherin β2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403099-NIC

TNPO1 codifica a carioferina β2 (transportina-1), um recetor de importação nuclear regulado por RanGTP que reconhece sinais de localização nuclear do tipo PY e medeia o transporte seletivo de proteínas de ligação a RNA e outras cargas através do complexo do poro nuclear. Esta via de importação sustenta o metabolismo do RNA, a dinâmica dos grânulos de stress e a compartimentação núcleo-citoplasmática de fatores reguladores, ligando a atividade de TNPO1 ao controlo da expressão génica e à proteostase. Alterações no tráfego dependente de transportina têm sido associadas a perturbações no processamento de RNA e a fenótipos de agregação proteica observados na biologia relacionada com neurodegeneração, bem como a programas de sinalização proliferativa em modelos de cancro. Como resultado, TNPO1 é frequentemente estudado para dissecar mecanismos de especificidade do transporte nuclear, o acoplamento ao ciclo de Ran e de que forma RBPs mal localizadas afetam a homeostase celular.

karyopherin β2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TNPO1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TNPO1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TNPO1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TNPO1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.