karyopherin α3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410855

Panoramica

KPNA3 codifica la carioferina α3, un adattatore della famiglia importin-α che riconosce i segnali di localizzazione nucleare classici e si assembla con importin β per mediare il trasporto nucleo-citoplasmatico dipendente dalla GTPasi Ran attraverso il complesso del poro nucleare. Regolando l’ingresso nel nucleo di fattori di trascrizione, mediatori di segnalazione e altre proteine cargo, KPNA3 influenza i programmi di espressione genica, il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la segnalazione dell’immunità innata. Alterazioni della dinamica del trasporto nucleare che coinvolgono le vie delle importine sono state associate a proliferazione disregolata, segnalazione infiammatoria e interazioni ospite–patogeno in diversi contesti patologici. KPNA3 è quindi un bersaglio utile per analizzare come l’importazione selettiva dei cargo plasmi i fenotipi cellulari e le reti di trasduzione del segnale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO karyopherin α3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KPNA3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KPNA3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KPNA3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina karyopherin α3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KPNA3 per lo studio della segnalazione di karyopherin α3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KPNA3 critici per la funzione di karyopherin α3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KPNA3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal karyopherin α3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal karyopherin α3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KPNA3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal karyopherin α3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR karyopherin α3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KPNA3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KPNA3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.