Plásmido CRISPR de Activación (h) karyopherin α1: sc-402324-ACT

KPNA1 codifica la carioferina alfa 1, un adaptador importina-α que reconoce las señales clásicas de localización nuclear y acopla proteínas de carga a la importina-β para su transporte, regulado por la GTPasa Ran, a través del complejo del poro nuclear. Al controlar la entrada al núcleo de factores de transcripción, reguladores del ciclo celular y proteínas de respuesta al daño del ADN, KPNA1 contribuye a configurar programas de expresión génica, la regulación de la cromatina y la señalización adaptativa al estrés. Las alteraciones del tráfico nucleocitoplasmático que involucran vías de importinas se han asociado con señalización oncogénica, respuestas inmunes e inflamatorias deterioradas y dependencias del ciclo de vida viral, lo que hace a KPNA1 relevante para estudios mecanísticos de estos procesos. La actividad de KPNA1 también es pertinente para la proteostasis y para fenotipos de compartimentalización nuclear que influyen en la diferenciación y la identidad celular.

karyopherin α1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KPNA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

karyopherin α1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KPNA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KPNA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de karyopherin α1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KPNA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de karyopherin α1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía karyopherin α1 en células tumorales con expresión de KPNA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.