karyopherin 13 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404551

Panoramica

IPO13 codifica la carioferina 13 (importina-13), un recettore bidirezionale del trasporto nucleare che media, in modo dipendente da RanGTP, lo shuttling di specifici carichi proteici attraverso il complesso del poro nucleare. Controllando la dinamica di importazione/esportazione nucleare, IPO13 influenza i programmi trascrizionali, la progressione del ciclo cellulare e la segnalazione in risposta allo stress, regolando la localizzazione e la disponibilità dei carichi. Un trasporto nucleo‑citoplasmatico alterato è una caratteristica ricorrente della trasformazione oncogena e dei fenotipi neurodegenerativi, rendendo IPO13 un nodo rilevante per studiare come la fedeltà del trasporto plasmi la regolazione del genoma e la proteostasi. La funzione di IPO13 è inoltre pertinente nelle interazioni ospite–patogeno e nella segnalazione dell’immunità innata, in cui l’accesso al nucleo di fattori regolatori può rappresentare un passaggio limitante.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO karyopherin 13 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IPO13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IPO13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IPO13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina karyopherin 13.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IPO13 per lo studio della segnalazione di karyopherin 13, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IPO13 critici per la funzione di karyopherin 13
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IPO13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal karyopherin 13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal karyopherin 13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IPO13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal karyopherin 13 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR karyopherin 13 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IPO13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IPO13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.