JunD Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400713-ACT

Il gene umano **JUND** codifica **JunD**, un fattore di trascrizione bZIP (basic leucine zipper) del complesso **AP-1** che integra la segnalazione **MAPK/ERK** e **JNK** per regolare programmi dipendenti dal contesto di proliferazione, differenziamento, adattamento allo stress e apoptosi. Dimerizzando con membri delle famiglie **JUN** e **FOS**, JunD si lega a elementi di tipo **TRE/CRE** per modulare l’espressione dei geni “immediati-precoci” e le risposte trascrizionali associate alla cromatina. JunD partecipa all’omeostasi redox e a vie responsive a citochine e fattori di crescita, influenzando il controllo del ciclo cellulare e la funzione mitocondriale in condizioni di stress ossidativo. Un’attività **AP-1** deregolata che coinvolge fattori della famiglia **JUN**, incluso JunD, è associata a reti trascrizionali oncogeniche, segnalazione infiammatoria e rimodellamento aberrante dell’espressione genica specifica di tessuto nel cancro e in altre malattie complesse.

JunD Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JUND senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JunD Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JUND nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JUND, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JunD. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JUND nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JunD nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JunD nelle cellule tumorali con espressione di JUND silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.