JAZF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404839-ACT

JAZF1 (juxtaposto a outro proteína de dedo de zinco 1) codifica um regulador transcricional do tipo “zinc finger” que modula programas de expressão gênica ligados ao metabolismo celular, à diferenciação e a respostas adaptativas ao estresse. Em células humanas, o JAZF1 tem sido associado a redes de controle transcricional nuclear que influenciam a homeostase de lipídios e glicose e contextos mais amplos de sinalização endócrina. Estudos genéticos relacionaram loci de JAZF1 a variações de características metabólicas, incluindo suscetibilidade ao diabetes tipo 2, e a atividade alterada de JAZF1 tem sido investigada em fisiopatologia relacionada ao sistema endócrino. Essas características tornam o JAZF1 um nó útil para dissecar circuitos transcricionais e a regulação de vias metabólicas em modelos de pesquisa biomédica.

JAZF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JAZF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JAZF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JAZF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JAZF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JAZF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JAZF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JAZF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JAZF1 em células tumorais com expressão de JAZF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.