Jade-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410620-ACT

JADE1 kodiert Jade-1, ein nukleäres PHD-Zinkfingerprotein, das als epigenetischer Regulator wirkt, indem es Histonmarkierungen erkennt und mit Histon-Acetyltransferase-Komplexen zusammenarbeitet, um die Chromatinzugänglichkeit und Transkription zu modulieren. Über diese Interaktionen beeinflusst Jade-1 Programme, die mit Zellzykluskontrolle, DNA-Schadensantworten und differenzierungsassoziierter Genexpression verknüpft sind. JADE1 wurde außerdem im Zusammenhang mit der ubiquitinabhängigen Regulation von Signalproteinen und Transkriptionsfaktoren untersucht, wodurch Chromatin-Remodeling mit Proteostase verknüpft wird. Eine veränderte JADE1-Expression oder eine Fehlregulation Jade-1-assoziierter Chromatinwege wurde in Kontexten aberranter Proliferation und tumorassoziierter transkriptioneller Reprogrammierung beschrieben, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt für eine pathway-orientierte Forschung unterstreicht.

Jade-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen JADE1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Jade-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des JADE1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der JADE1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Jade-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native JADE1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Jade-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Jade-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem JADE1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.