JAB1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-424107-NIC

O gene Cops5 de camundongo codifica a JAB1 (CSN5), a subunidade metaloprotease do signalossoma COP9 que catalisa a desnedilação de culinas para regular a atividade das ligases E3 de ubiquitina do tipo cullin-RING e a proteostase. Por meio dessa função, a JAB1 coordena a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e os desfechos da transdução de sinais ao controlar a degradação e a localização de proteínas regulatórias-chave, incluindo moduladores de programas transcricionais mediados por AP-1. A JAB1 também se conecta a vias que governam apoptose, respostas ao estresse e sinalização inflamatória, vinculando a regulação dependente de ubiquitina ao controle transcricional específico do contexto. A disfunção de CSN5/COP9 tem sido associada a proliferação aberrante e a estados de sinalização alterados em múltiplos modelos relevantes para doenças, tornando o Cops5 um alvo frequente em estudos mecanísticos do controle da via ubiquitina–proteassoma.

JAB1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Cops5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Cops5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Cops5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Cops5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.