ITI-H1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403720-NIC

ITIH1 は、肝臓由来の分泌性糖タンパク質であるインターαトリプシンインヒビター重鎖1（inter-α-trypsin inhibitor heavy chain 1：ITI-H1）をコードします。ITI-H1 は、ビクニンを含むインターαインヒビター複合体を介してヒアルロン酸と共有結合することで、細胞外マトリックス（ECM）の構築・組織化に寄与します。この作用は、ヒアルロン酸依存的な過程を調節することで、細胞周囲マトリックスの安定性、細胞−マトリックス相互作用、ならびに炎症性微小環境に影響を与えます。ITI-H1 は、急性期反応の生物学、細胞外空間でのプロテアーゼ制御、そして間質マトリックスのリモデリングといった文脈で研究されることが多い分子です。ITIH1 の発現変動や遺伝的多型は、炎症・線維化の各種病態や、がん関連微小環境の研究において報告されており、ヒトモデルにおけるマトリックス生物学および疾患関連性の標的としての有用性が示唆されています。

ITI-H1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITIH1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITIH1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITIH1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITIH1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。