IRX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404632

Panoramica

IRX3 (Iroquois homeobox 3) codifica un fattore di trascrizione homeobox che contribuisce a stabilire programmi trascrizionali durante il patterning embrionale e l’organogenesi, con ruoli dipendenti dal contesto nella specificazione del destino cellulare e nella differenziazione. Nelle cellule umane, IRX3 si integra con reti di segnalazione dello sviluppo, incluse vie collegate ai segnali Wnt e BMP, per orientare le decisioni di linea cellulare e l’espressione genica specifica dei tessuti. Al di là dello sviluppo, alterazioni nella regolazione di IRX3 sono state associate a fenotipi metabolici e a cambiamenti nella biologia degli adipociti, e un’espressione disregolata di IRX3 è stata riportata in molteplici contesti tumorali. Queste caratteristiche rendono IRX3 un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale, lo stato di differenziazione e i circuiti di regolazione genica guidati dalle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IRX3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IRX3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IRX3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRX3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IRX3 per lo studio della segnalazione di IRX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IRX3 critici per la funzione di IRX3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IRX3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IRX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IRX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IRX3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IRX3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IRX3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IRX3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IRX3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.