IRS-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400474-NIC

Das Insulinrezeptor-Substrat 2 (IRS2) kodiert IRS‑2, ein Docking-Adapterprotein, das Signale von den Insulin- und IGF‑1‑Rezeptoren an nachgeschaltete Effektoren weiterleitet, die den Glukosestoffwechsel, die Lipidhomöostase, Zellwachstum und Überleben steuern. Nach rezeptorvermittelter Tyrosinphosphorylierung rekrutiert IRS‑2 SH2-Domänen-Proteine wie PI3K, um die AKT/mTOR-Signalübertragung zu aktivieren, und ist zudem mit RAS–MAPK-Signalwegen verknüpft, die Transkriptions- und Stoffwechselprogramme regulieren. Die IRS‑2-Aktivität beeinflusst die Insulinsensitivität, die hepatische Glukoneogenese und die Funktion von Adipozyten; eine veränderte IRS2-Signalgebung wurde mit metabolischer Dysfunktion und Insulinresistenz in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation der IRS‑2-abhängigen Signalübertragung wird außerdem in Zusammenhängen aberranter Proliferation und Stressantworten untersucht, bei denen ein Umbau des PI3K–AKT-Signalwegs zu krankheitsrelevanten Phänotypen beiträgt.

IRS-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IRS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IRS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IRS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IRS2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.