IRF3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417171-ACT

インターフェロン制御因子3（IRF3）は広範な組織で発現する転写因子であり、自然免疫における抗ウイルス応答の中枢的ハブとして機能する。細胞質内のDNAまたはRNAを感知すると、IRF3はcGAS–STINGやRIG-I/MDA5–MAVSなどのパターン認識受容体経路の下流で活性化され、TBK1/IKKεによるリン酸化を介して二量体化、核内移行が促進され、I型インターフェロンおよびインターフェロン刺激遺伝子の誘導を引き起こす。IRF3はさらにNF-κBシグナル、アポトーシス、炎症性サイトカインプログラムとも連携し、病原体や細胞ストレスに対する細胞内在的な応答を形作る。IRF3活性の破綻は、感染症モデル、自己炎症性表現型、腫瘍—免疫相互作用にわたって観察される異常なインターフェロンシグネチャーに関与するとされ、免疫制御の機構研究における重要な結節点となっている。

IRF3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IRF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IRF3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IRF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIRF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IRF3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIRF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIRF3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIRF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIRF3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。