INTS3 Lentiviral Activation Particles (h): sc-408952-LAC

INTS3 kodiert die Integrator-Komplex-Untereinheit 3, einen zentralen Bestandteil der Integrator-Maschinerie, die die mit der RNA-Polymerase II gekoppelte RNA-Verarbeitung koordiniert, einschließlich der 3′-End-Bildung von snRNAs sowie umfassender Programme der Transkriptionskontrolle. Durch seine Beteiligung an Integrator-abhängigem Transkriptionspausieren und der Termination beeinflusst INTS3 die RNA-Reifung, die Homöostase der Genexpression und nachgelagerte Signalwege, die mit Zellzyklusprogression und Genomerhalt verknüpft sind. Störungen von Integrator-Untereinheiten wurden mit fehlregulierten Transkriptionsnetzwerken und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch INTS3 einen nützlichen Ansatzpunkt darstellt, um Defekte der RNA-Biogenese und transkriptionsgekoppelte Prozesse zu untersuchen, die für krankheitsassoziierte Veränderungen der Genexpression relevant sind.

INTS3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente INTS3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

INTS3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der INTS3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen INTS3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen INTS3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.