Plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α4/ITGA4/CD49d (m): sc-421162

Présentation

Itga4 code l’intégrine α4 (ITGA4/CD49d), une sous-unité α qui s’associe à β1 ou β7 pour former les intégrines α4β1 (VLA-4) et α4β7, médiateurs centraux de l’adhésion cellule–cellule et cellule–matrice. Ces récepteurs se lient à des ligands tels que VCAM1 et la fibronectine, coordonnant le trafic leucocytaire, l’adhésion ferme et la migration transendothéliale lors de la surveillance immunitaire et de l’inflammation. La signalisation d’ITGA4 s’intègre aux voies d’adhésion focale et de remodelage du cytosquelette pour influencer la migration, la survie et les programmes d’activation, et elle contribue au positionnement des cellules hématopoïétiques et lymphoïdes au sein des tissus. Une activité dérégulée de l’intégrine α4 est largement étudiée dans la physiopathologie inflammatoire et auto-immune, ainsi que dans les interactions tumeur–stroma qui favorisent l’invasion et la dissémination métastatique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α4/ITGA4/CD49d (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Itga4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Itga4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Itga4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Integrin α4/ITGA4/CD49d.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Itga4 pour l'étude de la signalisation de Integrin α4/ITGA4/CD49d, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Itga4 essentiels à la fonction de Integrin α4/ITGA4/CD49d
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Itga4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Integrin α4/ITGA4/CD49d plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Integrin α4/ITGA4/CD49d plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Itga4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Integrin α4/ITGA4/CD49d plasmide HDR (m) et le Integrin α4/ITGA4/CD49d (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Itga4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Itga4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.