Integrin α2/ITGA2/CD49b Double Nickaseプラスミド (h): sc-400913-NIC

ITGA2はインテグリンα2（CD49b）をコードしており、インテグリンβ1とヘテロ二量体を形成して、細胞—細胞外マトリックス接着およびメカノトランスダクションを担うα2β1コラーゲン／ラミニン受容体となります。フォーカルアドヒージョンキナーゼ（FAK）シグナル、Srcファミリーキナーゼ、ならびにRho GTPase依存的な細胞骨格リモデリングと連関することで、ITGA2はマトリックスの組成や硬さに対する応答としての細胞遊走、浸潤、生存に影響を与えます。血小板を含むさまざまな細胞種において、α2β1はコラーゲン依存的接着と、活性化状態を調節し得るインテグリンの「アウトサイドイン」シグナル伝達を支持します。ITGA2発現やインテグリンシグナルの異常は、腫瘍—間質相互作用、線維化リモデリング、炎症細胞トラフィッキング、血栓症関連の表現型といった文脈で頻繁に研究されています。

Integrin α2/ITGA2/CD49b ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。