Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickaseプラスミド (h): sc-401275-NIC

ITGA1はインテグリンα1（CD49a）をコードしており、インテグリンβ1とヘテロ二量体を形成して、細胞—細胞外マトリックス接着と双方向シグナル伝達を担うα1β1コラーゲン／ラミニン受容体として機能します。ITGA1は、フォーカルアドヒージョン複合体との連結や、FAK/Src、PI3K–AKT、MAPKなどの経路を介して、細胞骨格の再構築、遊走、生存、メカノトランスダクションに影響を与えます。CD49aは複数の組織区画および免疫細胞サブセットで発現しており、組織常在性、基底膜への接着、マトリックス依存的な分化などの過程を支えます。ITGA1シグナルの制御異常や細胞—マトリックス相互作用の変化は、線維化、炎症、腫瘍細胞の浸潤・転移と関連づけられており、接着駆動性の表現型を研究するうえで有用なノードとなります。

Integrin α1/ITGA1/CD49a ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。