Plasmide CRISPR d'Activation (h) Inhibin β-A: sc-402676-ACT

INHBA code la sous-unité humaine inhibine bêta‑A, qui forme un homodimère pour donner l’activine A ou un hétérodimère avec l’inhibine alpha pour former l’inhibine A, deux modulateurs clés de l’endocrinologie de la reproduction et de l’homéostasie tissulaire. La signalisation activine/inhibine mobilise les voies de la superfamille TGF‑β, notamment des programmes transcriptionnels médiés par SMAD2/3 qui régulent la prolifération et la différenciation cellulaires, le remodelage de la matrice extracellulaire et les réponses inflammatoires. L’activité d’INHBA a été impliquée dans des processus du développement et la réparation des plaies, et une expression altérée est rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, notamment la fibrose et le remodelage du microenvironnement associé aux tumeurs. En tant que composant ligand sécrété, l’inhibine bêta‑A constitue également un nœud reliant la signalisation paracrine à des modifications d’expression génique en aval dans divers types cellulaires.

Inhibin β-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de INHBA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Inhibin β-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus INHBA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription INHBA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Inhibin β-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus INHBA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Inhibin β-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Inhibin β-A dans les cellules tumorales présentant une expression de INHBA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.