Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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INCENP Double Nickase Plasmid (h): sc-403186-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das INCENP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- INCENP Double-Nickase-Plasmid (h) und INCENP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf INCENP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: INCENP: sc-376514
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
INCENP Double Nickase Plasmid (h) | sc-403186-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INCENP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403186-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INCENP (inneres Zentromerprotein) ist ein zentraler Bestandteil des Chromosomal-Passenger-Komplexes (CPC) zusammen mit AURKB, BIRC5/Survivin und CDCA8 und koordiniert Kinetochor-Mikrotubuli-Anheftungen, Chromosomenkondensation und die Zytokinese. Durch die Lokalisierung an das innere Zentromer und die Spindel-Mittelzone dient INCENP als Gerüst für die Aurora‑B-Signalgebung, um während der Mitose Fehlerkorrektur und den Spindelaufbau-Checkpoint zu regulieren. Eine Störung von INCENP beeinträchtigt die Chromosomentrennung und die Midbody-Bildung, was zu Aneuploidie und genomischer Instabilität führt. Veränderte Expression oder eine fehlregulierte CPC-Aktivität wird häufig im Kontext der Biologie proliferativer Erkrankungen, des Versagens mitotischer Checkpoints und von Phänotypen chromosomaler Instabilität untersucht.
INCENP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des INCENP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von INCENP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die INCENP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit INCENP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.