Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-3/IL-5/GM-CSFRβ: sc-401045-ACT

CSF2RB codifica la subunidad β común compartida por los complejos receptores de IL‑3, IL‑5 y GM‑CSF, formando una unidad de señalización de alta afinidad junto con cadenas α específicas del ligando en células hematopoyéticas y mieloides. Tras la unión de la citocina, la subunidad β del receptor de IL‑3/IL‑5/GM‑CSF inicia la señalización JAK2/STAT5 y coordina las cascadas PI3K–AKT y MAPK/ERK para regular la supervivencia, proliferación, diferenciación y activación funcional de los progenitores. Este nodo receptor es central en programas inflamatorios e inmunitarios impulsados por citocinas, al conectar la producción de células en la médula ósea con las respuestas efectoras periféricas. La señalización desregulada de CSF2RB se estudia en el contexto de mielopoyesis aberrante, activación leucocitaria alterada y mecanismos de enfermedad inflamatoria.

IL-3/IL-5/GM-CSFRβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSF2RB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-3/IL-5/GM-CSFRβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSF2RB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSF2RB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-3/IL-5/GM-CSFRβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSF2RB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-3/IL-5/GM-CSFRβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-3/IL-5/GM-CSFRβ en células tumorales con expresión de CSF2RB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.