IL-28R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402530-ACT

IFNLR1 kodiert den Interferon-Lambda-Rezeptor 1 (IL-28Rα), die ligandenbindende Untereinheit des Typ-III-Interferonrezeptorkomplexes, die zusammen mit IL10RB die Antworten auf Zytokine der IFN-λ-Familie vermittelt. Die Rezeptorbindung aktiviert die JAK/STAT-Signalübertragung und treibt eine STAT1/STAT2/IRF9-abhängige Transkription interferonstimulierter Gene an, die die antivirale Abwehr der epithelialen Barriere und die mukosale Immunität prägt. Die Aktivität von IFNLR1 beeinflusst die Programmierung der angeborenen Immunität, die Antigenpräsentation und den Entzündungstonus in epithelreichen Geweben und verknüpft die Rezeptorexpression mit Unterschieden in der antiviralen Restriktion und immunvermittelten Pathologie. Eine fehlregulierte IFN-λ/IFNLR-Signalisierung wurde im Zusammenhang mit der Anfälligkeit für respiratorische und gastrointestinale Virusinfektionen, chronischen Entzündungen und Tumor‑Immun‑Interaktionen untersucht.

IL-28R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFNLR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-28R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFNLR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFNLR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-28R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFNLR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-28R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-28R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFNLR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.