IL-28B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406651-ACT

Humanes **IFNL3** kodiert Interferon Lambda 3 (IL‑28B), ein Typ‑III‑Interferon, das über den Rezeptorkomplex **IFNLR1/IL10RB** signalisiert, JAK–STAT‑Signalwege aktiviert und interferon‑stimulierte Gene (ISGs) induziert, die die intrinsische antivirale Abwehr an Epithel- und Barriereoberflächen prägen. Durch IL‑28B ausgelöste Transkriptionsprogramme regulieren die angeborene Immunsensorik, die Antigenpräsentation und den Entzündungsgrundton und greifen dabei in STAT1/STAT2–IRF9‑(ISGF3)‑ sowie IRF‑vermittelte Netzwerke ein. Unterschiede in der IFNL3‑Expression wurden mit unterschiedlichen Wirtsantworten auf Virusinfektionen und immunvermittelte Entzündungen in Verbindung gebracht, was IFNL3 zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung von Zytokin‑Crosstalk und der Regulation von Interferon‑Signalwegen macht. In Zellmodellen hilft die Modulation von IFNL3 dabei, epitheliales Immunsignaling, Mechanismen der Virusrestriktion und die nachgelagerte ISG‑Dynamik zu untersuchen, ohne Pathogenkomponenten direkt zu verändern.

IL-28B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFNL3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-28B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFNL3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFNL3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-28B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFNL3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-28B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-28B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFNL3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.