IL-17RA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401447-ACT

IL17RA kodiert den Interleukin-17-Rezeptor A (IL-17RA), eine weit verbreitet exprimierte Rezeptoruntereinheit, die mit IL-17RC dimerisiert, um die Signalübertragung durch IL-17A und IL-17F zu vermitteln, und die zudem an Rezeptorkomplexen für andere Zytokine der IL-17-Familie beteiligt sein kann. Die Ligandenbindung aktiviert ACT1/TRAF6-abhängige Signalkaskaden, die auf NF-κB-, MAPK- und C/EBP-Signalwege zusammenlaufen und die Transkription von Chemokinen, Zytokinen und antimikrobiellen Effektoren fördern, welche die Rekrutierung von Neutrophilen und die Immunität der epithelialen Barriere koordinieren. Die IL-17RA-Signalgebung prägt Entzündungsprogramme an mukosalen und stromalen Oberflächen und überschneidet sich mit angeborenen und adaptiven Immunantworten, einschließlich der Th17-vermittelten Biologie. Eine fehlregulierte Aktivität des IL-17RA-Signalwegs wurde mit Mechanismen chronischer Entzündungs- und Autoimmunerkrankungen in Verbindung gebracht und kann in unterschiedlichen Kontexten tumorassoziierte Entzündung sowie Gewebeumbau beeinflussen.

IL-17RA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL17RA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-17RA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL17RA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL17RA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-17RA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL17RA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-17RA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-17RA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL17RA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.