IL-10 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421076-LAC

L’interleuchina-10 murina (Il10) codifica per IL-10, una citochina immunoregolatoria pleiotropica prodotta da molteplici sottopopolazioni di leucociti, che limita l’infiammazione eccessiva e promuove l’omeostasi tissutale. IL-10 segnala principalmente attraverso il complesso recettoriale dell’IL-10 per attivare le vie JAK1/TYK2–STAT3, determinando la soppressione dei programmi citochinici pro-infiammatori e la modulazione della presentazione dell’antigene e degli stati di attivazione delle cellule mieloidi. Attraverso effetti sulla polarizzazione dei macrofagi, sulla maturazione delle cellule dendritiche e sulla funzione effettrice delle cellule T, IL-10 contribuisce a plasmare la comunicazione tra immunità innata e adattativa nei tessuti di barriera e nei tessuti linfoidi. Un’attività alterata di IL-10 è frequentemente studiata, nei modelli murini, nel contesto dell’infiammazione intestinale, dell’autoimmunità, dell’immunopatologia legata alle infezioni e della regolazione immunitaria associata ai tumori.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-10 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Il10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IL-10 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Il10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IL-10. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Il10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.