IKKβ Double Nickaseプラスミド (h): sc-400247-NIC

IKBKB は、IκB タンパク質をリン酸化してユビキチン化と分解を誘導し、NF-κB 転写因子の核内移行を可能にする IKK 複合体の触媒中核である IKKβ をコードしています。この古典的 NF-κB 経路を介して、IKKβ は TNFR や TLR/IL-1R などの受容体からのシグナルを統合し、炎症性遺伝子発現、自然免疫応答、細胞生存プログラム、ならびにストレス適応を協調的に制御します。IKBKB 活性の破綻は、炎症性疾患や自己免疫疾患で観察される持続的な NF-κB シグナル伝達、および腫瘍生物学において増殖、アポトーシス抵抗性、微小環境のサイトカインネットワークに影響し得る現象と関連付けられています。中心的なシグナル伝達ノードとして、IKKβ はサイトカイン駆動性転写における役割、MAPK やインターフェロン応答との経路クロストーク、刺激依存的なリン酸化プロテオーム変化などの観点から頻繁に研究されています。

IKKβ ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IKBKB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IKBKB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IKBKBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IKBKBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。