IGFBP6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404768-NIC

IGFBP6は、インスリン様成長因子結合タンパク質6（insulin-like growth factor binding protein 6）をコードしており、IGF-IIに高い親和性で結合する分泌性の制御因子として、IGFの生物学的利用能（バイオアベイラビリティ）と、それに続くIGF1R（IGF-1受容体）駆動性シグナル伝達を調節します。細胞外のIGF-IIを緩衝（バッファリング）することで、IGFBP6はPI3K–AKTおよびMAPK経路の活性に影響を与え、細胞増殖・生存・分化といったプログラムを左右します。さらにIGFBP6は、細胞移動や細胞外マトリックスとの相互作用とも関連づけられており、組織リモデリングや、細胞と微小環境のクロストークにおける役割を支持する知見があります。IGFBP6の発現変化は、複数のがん研究および代謝研究の文脈で報告されており、IGF軸の破綻（ディスレギュレーション）や成長因子依存的な表現型を検討するうえで重要なノードとなります。

IGFBP6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IGFBP6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IGFBP6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IGFBP6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IGFBP6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。