IFN-α/βRα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401662-ACT

IFNAR1 codifica a subunidade alfa do receptor de interferon-α/β (IFN-α/βRα), um componente essencial de superfície celular do complexo receptor de interferon tipo I que se liga a IFN-α e IFN-β para iniciar sinalização antiviral e imunomoduladora. A ligação do ligante ativa JAK1/TYK2 e, a jusante, programas transcricionais mediados por STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3), induzindo genes estimulados por interferon que moldam a imunidade inata, a apresentação de antígenos e o tônus inflamatório. Vias dependentes de IFNAR1 interagem com a sinalização de NF-κB e MAPK e influenciam a sobrevivência e diferenciação celulares, bem como redes de citocinas, em compartimentos imunes e estromais. A desregulação da sinalização de IFNAR1 está implicada em respostas antivirais alteradas e em fenótipos imunes impulsionados por interferon, relevantes para a biologia de infecções, assinaturas associadas à autoimunidade e interações entre tumor e sistema imune.

IFN-α/βRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNAR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFN-α/βRα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNAR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNAR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFN-α/βRα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNAR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFN-α/βRα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFN-α/βRα em células tumorais com expressão de IFNAR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.