Plásmido CRISPR de Activación (h) IFN-α/βRα: sc-401662-ACT

IFNAR1 codifica la subunidad alfa del receptor de interferón α/β (IFN-α/βRα), una subunidad esencial de superficie celular del complejo receptor de interferón de tipo I que se une a IFN-α e IFN-β para iniciar señales antivirales e inmunomoduladoras. La unión del ligando activa JAK1/TYK2 y, aguas abajo, programas transcripcionales mediados por STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3), induciendo genes estimulados por interferón que configuran la inmunidad innata, la presentación de antígenos y el tono inflamatorio. Las vías dependientes de IFNAR1 convergen con la señalización de NF-κB y MAPK e influyen en la supervivencia y diferenciación celulares, así como en redes de citocinas a través de compartimentos inmunitarios y estromales. La señalización desregulada de IFNAR1 se asocia con respuestas antivirales alteradas y fenotipos inmunitarios impulsados por interferón, relevantes para la biología de las infecciones, firmas vinculadas a autoinmunidad e interacciones entre tumor e inmunidad.

IFN-α/βRα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFNAR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFN-α/βRα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFNAR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFNAR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFN-α/βRα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFNAR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFN-α/βRα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFN-α/βRα en células tumorales con expresión de IFNAR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.