Id3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400944-ACT

ID3 codifica a proteína humana Id3, um regulador transcricional do tipo hélice–alça–hélice (HLH) que não possui domínio de ligação ao DNA e modula a expressão gênica ao sequestrar proteínas E e outros fatores bHLH. Por meio desse mecanismo dominante-negativo, Id3 influencia o comprometimento de linhagem, a progressão do ciclo celular e programas de diferenciação em contextos imunológico, vascular e epitelial, integrando-se a entradas de sinalização como TGF-β/BMP e vias mitogênicas. Alterações na atividade de ID3 têm sido associadas à proliferação e diferenciação desreguladas, com relevância relatada em estados transcricionais oncogênicos, remodelamento vascular e função de células imunes. Essas características tornam ID3 um nó útil para estudar o equilíbrio de redes transcricionais, decisões de destino específicas do contexto e plasticidade fenotípica impulsionada por vias de sinalização.

Id3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ID3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Id3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ID3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ID3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Id3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ID3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Id3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Id3 em células tumorais com expressão de ID3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.