Plasmide Double Nickase (h) ICAD: sc-403560-NIC

DFFA code la sous-unité alpha du facteur de fragmentation de l’ADN (ICAD), un inhibiteur essentiel et une protéine chaperon de la nucléase DFFB/CAD, qui gouverne la fragmentation apoptotique de l’ADN. Au cours de l’apoptose, le clivage d’ICAD par la caspase-3 libère CAD sous sa forme active, permettant la génération de cassures internucléosomiques de l’ADN, ce qui relie DFFA à la signalisation des caspases, à la condensation de la chromatine et à la phase d’exécution de la mort cellulaire programmée. ICAD favorise également le repliement correct et la stabilisation de CAD, ce qui rend DFFA important pour une activité nucléasique régulée et pour l’intégrité du génome en situation de stress. La dérégulation des voies apoptotiques associées à DFFA a été impliquée dans des altérations de la survie cellulaire et des réponses aux dommages de l’ADN observées dans de multiples contextes pathologiques, notamment le cancer et les maladies neurodégénératives.

ICAD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DFFA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DFFA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DFFA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DFFA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.