I1PP2A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402988-ACT

ANP32A は I1PP2A をコードしており、I1PP2A は酸性でロイシンリッチな核内リン酸化タンパク質として、プロテインホスファターゼ 2A（PP2A）の阻害因子として機能し、リン酸化依存性のシグナル伝達やクロマチン関連プロセスを制御します。PP2A 活性を調節することで、I1PP2A は細胞周期の進行、DNA 損傷応答、転写プログラム、ならびにストレス適応型のシグナル伝達ネットワークに影響を与えます。ANP32A はアポトーシスや自然免疫応答の制御とも関連づけられており、ホスファターゼ制御の異常が細胞恒常性を変化させる状況でしばしば研究対象となります。ANP32A/I1PP2A の発現または機能の破綻は、腫瘍生物学、神経変性の機序、炎症性シグナル伝達と関連することが報告されており、経路中心の疾患モデルにおける重要性が示唆されています。

ANP32A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANP32Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANP32A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANP32A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANP32A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANP32Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANP32A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANP32A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANP32A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANP32A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。