HSPA5/BiP/GRP78 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400073-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HSPA5/BiP/GRP78O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HSPA5/BiP/GRP78 (h) e o Plasmídeo Double Nickase HSPA5/BiP/GRP78 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para HSPA5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HSPA5/BiP/GRP78 Anticorpo (76-E6): sc-13539
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HSPA5/BiP/GRP78 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400073-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSPA5/BiP/GRP78 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400073-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA5 codifica a chaperona residente no RE BiP/GRP78 (HSPA5), um regulador central da proteostase que se liga a polipeptídeos nascente, evita a agregação e auxilia o dobramento e a montagem de proteínas secretórias e de membrana. Como sensor e efetor central da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), a HSPA5 modula a sinalização de estresse do RE por meio das vias PERK–EIF2α, IRE1–XBP1 e ATF6, influenciando a tradução, o controle de qualidade e programas transcricionais adaptativos. A HSPA5 também participa da degradação associada ao RE (ERAD) e da homeostase de cálcio, acoplando a capacidade de dobramento aos estados redox e metabólicos. A atividade desregulada de HSPA5 está ligada a doenças caracterizadas por estresse proteotóxico crônico, incluindo biologia tumoral, neurodegeneração, disfunção metabólica e estados inflamatórios, tornando-a um nó-chave para estudos mecanísticos de adaptação ao estresse.
HSPA5/BiP/GRP78 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HSPA5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HSPA5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HSPA5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HSPA5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.