HSL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401341-ACT

Das humane **LIPE**-Gen kodiert die hormonsensitive Lipase (HSL), eine zentrale neutrale Lipase, die Diacylglycerol und andere Lipidester hydrolysiert und so die intrazelluläre Mobilisierung von Lipiden reguliert. Die HSL-Aktivität integriert Katecholamin- und Insulinsignale über eine cAMP/PKA-abhängige Phosphorylierung sowie koordinierte Dynamiken von Lipidtröpfchen und unterstützt damit die Energiehomöostase in Adipozyten und steroidogenen Geweben. Eine veränderte Regulation von LIPE/HSL wurde mit gestörter Lipolyse, ektoper Lipidakkumulation und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit Insulinresistenz und Dyslipidämie assoziiert sind, wodurch LIPE ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Lipidsignalen und metabolischer Anpassung darstellt. Darüber hinaus kann ein LIPE-abhängiger Lipidfluss Entzündungswege und zelluläre Stressantworten beeinflussen, indem sich die Verfügbarkeit von Fettsäuren und nachgeschaltete Lipidmediatoren verändert.

HSL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LIPE-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HSL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LIPE-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LIPE-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HSL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LIPE-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HSL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HSL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LIPE-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.