HSBP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416835-NIC

ヒトHSBP1（heat shock factor binding protein 1）は小型のコイルドコイル型制御タンパク質で、熱ショック因子1（HSF1）に結合し、HSF1の三量体化と転写活性を抑制することで熱ショック応答を調節します。このフィードバック制御を通じて、HSBP1は分子シャペロンやストレス誘導性遺伝子発現を含むプロテオスタシス（タンパク質恒常性）プログラムの形成に寄与し、熱、酸化、ならびにプロテオトキシック（タンパク質毒性）ストレスに対する細胞の耐性に影響を与えます。HSBP1に連動した制御は、タンパク質品質管理、細胞周期進行、ストレス適応シグナル伝達を司る経路とも交差します。熱ショックシグナル伝達やシャペロンネットワークの破綻は、がん生物学、神経変性、その他のタンパク質ミスフォールディングを特徴とする疾患でしばしば関与が示されているため、HSBP1はストレス応答回路の機構解析に有用な結節点となります。

HSBP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSBP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSBP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSBP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSBP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。