HSBP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416835-ACT

ヒトHSBP1（heat shock factor binding protein 1）は、熱ショック応答を制御する小型のコイルドコイル型調節因子で、熱ショック因子1（HSF1）に結合し、HSF1の三量体化および転写出力を調節します。この負のフィードバック制御を通じて、HSBP1はHSP70/HSP90などのシャペロンの誘導を含むプロテオスタシス・プログラムや、タンパク質のフォールディング、翻訳、品質管理に関連するより広範なストレス適応経路の働きを微調整します。HSBP1活性の変化は、プロテオトキシックストレスに対する細胞の耐性を変化させ、腫瘍生物学、神経変性疾患、その他ストレスシグナルの破綻を特徴とする病態に関連する過程とも交差し得ます。これらの役割により、HSBP1はヒト細胞における熱ショック経路のダイナミクス、ストレス耐性、ならびに転写ネットワークのバッファリング機構を研究するうえで有用な標的となります。

HSBP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSBP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSBP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSBP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSBP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。