HRT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404761-ACT

Das humane Gen **HEY2 (HRT2)** kodiert einen basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsrepressor, der als kanonischer nachgeschalteter Effektor der Notch-Signalübertragung fungiert. Durch die Zusammenarbeit mit RBPJ/CSL-abhängigen Transkriptionskomplexen trägt HRT2 zur Regulation von Zellschicksalsentscheidungen, dem zeitlichen Ablauf der Differenzierung und der Gewebemusterbildung bei, mit besonders wichtigen Funktionen in kardiovaskulären und neuroentwicklungsbezogenen Programmen. HEY2 moduliert Transkriptionsnetzwerke, die die Reifung glatter Muskelzellen und Kardiomyozyten, die ventrikuläre Spezifizierung sowie epithelial-mesenchymale Transitionen steuern. Eine fehlregulierte HEY2-Expression bzw. -Signalwegaktivität wurde mit angeborenen Herzphänotypen, arrhythmieassoziierten Merkmalen und veränderten Differenzierungszuständen in Krebs- und Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht.

HRT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HEY2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HRT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HEY2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HEY2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HRT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HEY2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HRT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HRT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HEY2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.