HRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423518

概要

マウスTpt1は、ヒスタミン遊離因子（HRF）をコードしており、これはtranslationally controlled tumor protein（TCTP）としても知られる、進化的に保存された細胞質タンパク質です。HRFは、細胞増殖の制御、ストレス応答、生存シグナルの調節に関与するとされています。HRFはカルシウム恒常性、アポトーシス制御、炎症・免疫細胞機能の調節に関連する経路に関与し、サイトカイン放出や細胞活性化プログラムにおける役割も報告されています。HRF/TPT1活性の変化は、炎症および免疫シグナルの異常な制御不全に加え、腫瘍学や組織リモデリングに関わる異常な増殖表現型とも関連付けられています。これらの特性により、Tpt1はマウスモデル系において、ストレス適応機構、免疫制御、ならびに細胞運命決定を解析するための有用な標的となります。

HRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HRFタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HRFシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HRFの機能に不可欠なTpt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHRF CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HRF HDRプラスミド（m）および HRF HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。