Partículas Lentivirales de Activación (h) HP1γ: sc-417205-LAC

CBX3 codifica la proteína 1 de la heterocromatina gamma (HP1γ), un lector de cromatina que se une a H3K9me2/3 mediante su cromodominio y coordina la organización de la heterocromatina, la regulación transcripcional y la estabilidad del genoma. HP1γ participa en el silenciamiento epigenético, la respuesta al daño en el ADN, la temporización de la replicación y el procesamiento de ARN al servir como andamiaje de complejos asociados a la cromatina y modular la estructura de la cromatina de orden superior. A través de estas funciones, CBX3 influye en la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y las redes transcripcionales sensibles al estrés. La actividad y localización alteradas de CBX3/HP1γ se han asociado con estados epigenéticos desregulados observados en múltiples contextos de cáncer y en otras enfermedades vinculadas a la disfunción de la cromatina, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos del control transcripcional y del mantenimiento del genoma.

Las partículas de activación lentiviral HP1γ (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CBX3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HP1γ (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CBX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HP1γ. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CBX3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.