HNRNPA1L2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403579-ACT

HNRNPA1L2 kodiert einen dem heterogenen nukleären Ribonukleoprotein A1 ähnlichen Faktor, der an die RNA-Bindung und an die posttranskriptionelle Genregulation beteiligt ist, darunter prä‑mRNA‑Spleißen, mRNA‑Stabilität und nukleozytoplasmatischer Transport. Als Bestandteil von Ribonukleoprotein-Komplexen ist HNRNPA1L2 in der Lage, die Auswahl von Transkript-Isoformen sowie die Kopplung zwischen Transkription und RNA-Prozessierung zu beeinflussen und so Genexpressionsprogramme kontextabhängig zu formen. Eine veränderte Regulation von hnRNP-Familienproteinen wurde mit gestörtem RNA-Stoffwechsel, aberranten Spleißmustern und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und die neurodegenerationsbezogene Forschung relevant sind. Diese Eigenschaften machen HNRNPA1L2 zu einem nützlichen Ziel, um RNA-Prozessierungsnetzwerke und deren nachgeschaltete Effekte auf die Proteomdiversität zu untersuchen.

HNRNPA1L2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HNRNPA1L2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HNRNPA1L2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HNRNPA1L2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HNRNPA1L2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HNRNPA1L2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HNRNPA1L2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HNRNPA1L2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HNRNPA1L2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HNRNPA1L2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.