HNF-3γ Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401720-NIC

FOXA3 codifica o fator nuclear do hepatócito 3 gama (HNF-3γ), um fator de transcrição do tipo forkhead/winged-helix que regula a acessibilidade da cromatina e coordena programas transcricionais específicos de tecido durante o desenvolvimento do endoderma. Em células diferenciadas, o HNF-3γ contribui para redes gênicas do fígado e do epitélio gastrointestinal que controlam o metabolismo de glicose e lipídios, o processamento de xenobióticos e a função secretora, por meio de interações com vias de receptores nucleares e de fatores de transcrição hepatocitários. Alterações na expressão de FOXA3 ou em seus circuitos regulatórios têm sido associadas à desregulação da homeostase metabólica e a mudanças no estado de linhagem observadas em distúrbios hepatobiliares e gastrointestinais, tornando-o um nó útil para estudar o controle transcricional da identidade celular. O FOXA3 também é utilizado como marcador e modulador em modelos de reprogramação e diferenciação, nos quais a atividade de fator pioneiro molda o uso de enhancers e promotores.

HNF-3γ O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FOXA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FOXA3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FOXA3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FOXA3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.