HNF-1α Double Nickaseプラスミド (h): sc-400594-NIC

HNF1A は、ホームドメインを有する転写因子である肝細胞核因子 1-α（HNF-1α）をコードしており、プロモーターおよびエンハンサー配列に結合して、肝細胞、膵β細胞、腎上皮、腸管組織における遺伝子発現プログラムを制御します。HNF-1α は、HNF4A などの肝特異的転写因子と形成する転写ネットワークを介して、グルコース感知とインスリン分泌、脂質および胆汁酸代謝、上皮分化に関わる経路を協調的に統御します。HNF-1α 活性が攪乱されると、トランスポーターや代謝酵素の発現が変化し、細胞の恒常性や系譜特異的な遺伝子発現に影響を及ぼします。HNF1A の遺伝学的・機能的バリアントは、単一遺伝子性および複合的な代謝表現型と関連しており、代謝の転写制御を解析するための重要な結節点として広く用いられています。

HNF-1α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HNF1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HNF1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HNF1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HNF1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。