HMGCL Double Nickaseプラスミド (h): sc-403841-NIC

HMGCL は、HMG-CoA をアセト酢酸とアセチル CoA に変換することで、ケトン体生成およびロイシン分解（異化）の最終段階を触媒するミトコンドリア酵素、3-ヒドロキシメチル-3-メチルグルタリル-CoA リアーゼをコードします。この活性は、飢餓時やその他の代謝ストレス下における細胞のエネルギーバランスとミトコンドリアでのアセチル CoA の取り扱いを結び付け、脂肪酸酸化、アナプレロシス、レドックス恒常性を制御するより広範な経路とも接点を持ちます。HMGCL 機能の異常は、ケトン体産生および分岐鎖アミノ酸分解に影響する先天代謝異常と関連しており、代謝適応やミトコンドリア生理の研究において重要です。がん生物学や免疫代謝の分野では、HMGCL 依存的なケトン体代謝が、低酸素や栄養制限下での栄養素利用やシグナル状態に寄与する要素として検討されてきました。

HMGCL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HMGCL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HMGCL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HMGCLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HMGCLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。