HMG-1/HMGB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420871-ACT

Hmgb1 codifica HMG-1/HMGB1, uma proteína abundante de cromatina não histônica que se liga ao DNA e o curva, regulando a dinâmica dos nucleossomos, a transcrição, a replicação e o reparo do DNA. No núcleo, a HMGB1 contribui para a estabilidade do genoma ao participar das respostas a danos no DNA e influencia programas de expressão gênica ligados a decisões de destino celular. Quando liberada para o meio extracelular, a HMGB1 atua como um padrão molecular associado a dano (DAMP), modulando a sinalização imune inata e vias inflamatórias, incluindo respostas mediadas por receptores envolvendo TLRs e RAGE. A atividade desregulada de HMGB1 é amplamente estudada em contextos como inflamação estéril, autoimunidade, neuroinflamação, modelos biológicos de sepse e inflamação associada a tumores em sistemas murinos.

HMG-1/HMGB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hmgb1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HMG-1/HMGB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hmgb1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hmgb1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HMG-1/HMGB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hmgb1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HMG-1/HMGB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HMG-1/HMGB1 em células tumorais com expressão de Hmgb1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.