HLF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404752-ACT

ヒトHLF（hepatic leukemia factor）は、DNA上の制御配列に結合して転写を制御するPAR bZIP型転写因子をコードしており、細胞分化、概日リズム関連の転写、ストレス応答性遺伝子発現に関わる遺伝子プログラムを調節します。HLFは、造血系統のアイデンティティや発生タイミングを規定する転写ネットワークに関与し、下流では細胞周期制御や生存シグナル経路にも影響を及ぼします。HLF発現の破綻は、造血状態の変化や、白血病に関連する状況における腫瘍性の転写リプログラミングと関連づけられており、転写因子駆動型表現型を研究するうえで有用な結節点となります。核内レギュレーターとして、HLFはプロモーター／エンハンサー活性、遺伝子制御回路、系統特異的な転写可塑性への影響という観点から一般に解析されます。

HLF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HLFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HLF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HLF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHLF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HLFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHLF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHLF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHLF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHLF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。