Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401419-ACT

HDAC9 codifica a desacetilase de histonas 9, uma HDAC de classe IIa que modula a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais ao regular interações proteína–proteína dependentes de acetilação e recrutar complexos correpressores. A HDAC9 participa do controle epigenético da diferenciação celular, da sinalização responsiva ao estresse e da regulação de genes metabólicos, com papéis de destaque na biologia muscular e de células imunes. Por meio de crosstalk com redes transcricionais ligadas a MEF2 e NF-κB, a HDAC9 influencia transições de estado celular e a expressão de genes inflamatórios. A atividade ou expressão desregulada de HDAC9 tem sido associada a assinaturas transcricionais neurodesenvolvimentais, cardiovasculares e oncogênicas alteradas, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de regulação epigenética.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 9 (HDAC9). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 9 (HDAC9) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 9 (HDAC9) em células tumorais com expressão de HDAC9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.