Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400659-ACT

HDAC5 codifica a desacetilase de histonas 5, uma HDAC de classe IIa que modula a acessibilidade da cromatina e a transcrição ao regular a dinâmica de acetilação de lisina em conjunto com repressores transcricionais e co-reguladores. A atividade de HDAC5 é rigidamente controlada por transporte nucleocitoplasmático dependente de fosforilação, conectando a sinalização por cálcio e quinases a programas gênicos que governam a miogênese, a plasticidade neuronal e a adaptação metabólica. Por meio de interações com fatores como reguladores transcricionais da família MEF2, a HDAC5 ajuda a coordenar redes de diferenciação e de transcrição responsivas ao estresse. A expressão ou a localização desregulada de HDAC5 tem sido associada a estados epigenéticos alterados na biologia do câncer e a vias relevantes para o remodelamento cardíaco e para mecanismos de doenças neurodegenerativas.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 5 (HDAC5). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 5 (HDAC5) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 5 (HDAC5) em células tumorais com expressão de HDAC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.