Plásmido CRISPR de Activación (h) Histone Deacetylase 10 (HDAC10): sc-403221-ACT

HDAC10 codifica la desacetilasa de histonas 10, una desacetilasa dependiente de zinc de la familia de HDAC de clase II que modula el estado de acetilación de sustratos histónicos y no histónicos para configurar la accesibilidad de la cromatina y los programas transcripcionales. HDAC10 se ha vinculado a la regulación de la autofagia y de procesos asociados a los lisosomas, y contribuye a vías de homeostasis celular que influyen en la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. A través del control epigenético de la expresión génica, la actividad de HDAC10 se intersecta con redes que gobiernan la estabilidad del genoma y la señalización inflamatoria. La desregulación de la expresión o la función de HDAC10 se ha asociado con fenotipos alterados de células tumorales y otros estados transcripcionales relevantes para la enfermedad, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación epigenética.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HDAC10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone Deacetylase 10 (HDAC10) El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HDAC10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HDAC10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone Deacetylase 10 (HDAC10). A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HDAC10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone Deacetylase 10 (HDAC10) en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone Deacetylase 10 (HDAC10) en células tumorales con expresión de HDAC10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.