Histone cluster 1 H2BK Double Nickase Plasmid (h): sc-417678-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Histone cluster 1 H2BK Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Histone cluster 1 H2BK Double-Nickase-Plasmid (h) und Histone cluster 1 H2BK Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HIST1H2BK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Histone cluster 1 H2BK Double Nickase Plasmid (h) | sc-417678-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Histone cluster 1 H2BK Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417678-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HIST1H2BK kodiert ein replikationsabhängiges H2B-Familienhistone, das in Nukleosomen eingebaut wird, um die genomische DNA zu verdichten und die Zugänglichkeit des Chromatins zu regulieren. Über seine Rolle bei der Nukleosomenassemblierung, dem Histonaustausch und der höhergeordneten Chromatinorganisation beeinflusst Histone cluster 1 H2BK die transkriptionelle Kontrolle, das Timing der DNA-Replikation sowie Signalgebung und Reparatur bei DNA-Schäden. Posttranslationale Modifikationen von H2B, darunter Ubiquitinierung und Phosphorylierung, sind an einer Wechselwirkung („Crosstalk“) mit anderen Histonmarkierungen beteiligt, die den Zellzyklusfortschritt und die Genomstabilität koordinieren. Eine dysregulierte Dosierung von Histongenen oder veränderte Chromatinzustände werden breit mit onkogenen Transkriptionsprogrammen und fehlerhafter DNA-Reparatur in Verbindung gebracht, was HIST1H2BK zu einem nützlichen Locus für die Untersuchung epigenetischer Mechanismen macht, die für krankheitsassoziiertes Chromatin-Remodeling relevant sind.
Histone cluster 1 H2BK Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HIST1H2BK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HIST1H2BK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HIST1H2BK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HIST1H2BK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.